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NobleRyder Western及IP細胞裂解液

  • 型   號:P4829
  • 價   格:
  • 更新時間:2024-09-26
  • 廠家性質:經銷商

NobleRyder Western及IP細胞裂解液(無抑制劑) 即用型液體試劑 P4829-100ml

 Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)

產品簡介:

多種成分均可以從細胞中提取總蛋白,如Triton、SDS、NP-40等,Western及IP細胞裂解液是采用一種非變性裂解方法來裂解細胞,并獲得總蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質可以用于PAGE電泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等,主要由Tris-HCl、NaCl、低濃度Triton X-100, 低濃度sodium pyrophosphate等組成,不含蛋白酶、磷酸酶抑制劑,并維持原有的蛋白間相互作用。

Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)(Cell lysis buffer for Western and IP without inhibitors)得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質,不宜用Bradford法測定由Western及IP細胞裂解液獲得樣本的蛋白濃度。

NobleRyder Western及IP細胞裂解液

產品組成:

                           編號

名稱

P4829

Storage

Western及IP細胞裂解液(無抑制劑)

100ml

-20℃

使用說明書

1份

 

操作步驟(僅供參考)

(一)貼壁培養細胞

Western及IP細胞裂解液室溫溶解混勻,根據需要選擇添加或不添加蛋白酶抑制劑。

去除貼壁細胞的培養液,用PBS、NS或無血清培養液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。

按照6孔板每孔加入100~200μl裂解液的比例,加入Western及IP細胞裂解液。移液器輕輕吹打,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液作用于細胞1~5s內,細胞就會被裂解。

10000~12000g,離心3~5min(如果用冷凍離心機4℃離心效果更佳),取上清。

進行后續的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養細胞

1、 Western及IP細胞裂解液室溫溶解混勻,根據需要選擇添加或不添加蛋白酶抑制劑。

2、 低速離心懸浮細胞,棄上清,收集沉淀。

3、 用手指輕彈細胞,使其松散。按照6孔板每孔細胞加入100~200μl裂解液的比例,加入Western及IP細胞裂解液。通常6孔板每孔細胞加入100μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150~200μl,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。

4、 10000~12000g,4℃離心3~5min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

5、 進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀等操作。

(三)組織樣本

1、 Western及IP細胞裂解液置于室溫溶解混勻,根據實驗需要選擇添加或不添加蛋白酶抑制劑。

2、 把組織jian切成細小的碎片,越小越好。

3、 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控制在1~2min之內,以減少蛋白的降解。

4、 按照每20mg組織加入100~200μl裂解液的比例,加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30~60min。

5、 步驟3、4亦可以采用如下過程:按照每20mg組織加入100~200μl裂解液的比例加入Western及IP細胞裂解液。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,過程盡量控制在1~2min之內,以減少蛋白的降解。

6、 按照每20mg組織加入100~200μl裂解液的比例,加入Western及IP細胞裂解液。

7、 10000~12000g,4℃離心10~15min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。

8、 進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

注意事項:

1.去除貼壁細胞的培養液時,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。

2.如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。

3.如果細胞量較多,必需分裝成50~100萬細胞/離心管,然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分,而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。

4.如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿5.器那樣裂解得比較充分。

6.溶解NobleRyder Cell lysis buffer for Western and IP時,應盡量縮短溶解時間,避免裂解液中的有效成分失效。

7.細胞裂解的操作步驟,應置于冰上或4℃進行。

 

有效期: 12個月有效。

NobleRyder Western及IP細胞裂解液

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