Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉錄
Script IV RT MasterMix采用第四代高達60℃的全新高溫逆轉錄酶，可以通讀GC含量豐富，二級結構復雜的RNA模板，極大提高了逆轉錄效率，CT值一般提早2-3個循環。Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉錄
Script IV RT MasterMix
( Perfect for qPCR )
Script IV RT MasterMix ( for qPCR)反轉錄
目錄號:71618
產品內容
Components | 71618-50 50 rxns (20 μl/rxn) | 71618-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x RT Mix IV | 200μl | 400μl |
RNase free H2O | 1.5 ml | 1.5 ml |
保存條件
-20℃保存，有效期 12 個月。
產品簡介
Script IV RT MasterMix采用第四代高達60℃的全新高溫逆轉錄酶，可以通讀GC含量豐富，二級結構復雜的RNA模板，極大提高了逆轉錄效率，CT值一般提早2-3個循環。
5x RT Mix IV為一管式逆轉錄預混液，含有逆轉錄所需的所有試劑（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture、RT Buffer），并且，針對qPCR進行特別優化oligodT和N6隨機引物配比，使cDNA合成可從RNA轉錄本的各個區域起始并具有相同的逆轉錄效率，zui大程度保證了qPCR結果的真實性和可重復性。
適用范圍
第一鏈cDNA合成，尤其高GC含量，復雜模板的cDNA合成?？捎糜诟呖截悺⒌涂截惢虻臋z測。
注意事項
1． 避免RNase污染。
2． 為保證反轉錄成功，建議使用高質量的RNA樣品。
3． 5x RT Mix IV含有甘油比較粘稠，容易吸附在管壁和吸頭外，導致損失， 使用前請點甩離心后取用。 5x RT Mix IV包含的酶過量，即使每次分別按照3.8 μl使用，也不影響使用效果。
4． 20 μl逆轉錄反應體系建議加入不超過1μg的Total RNA。如果目的基因的表達量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否則，RNA量過高，可能會超出后續qPCR的線性范圍。
5． 本產品適用于包含Ploy (A)結構的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)結構的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不適用于miRNA等小RNA模板。
6． 如果模板具有復雜二級結構或高GC區域，推薦使用變性步驟，即在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5 min后迅速轉移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混勻，50°C孵育15 min進行逆轉錄。
第一連 cDNA 合成 (以 20 μl 反應體系為例)
重要提示：操作前，請將各組分輕彈混勻，點甩離心后置冰上備用。
1． 反應體系的配制
于冰上，在PCR管中，加入以下組分：
Components | Volume |
Total RNA / mRNA | 50ng ~ 1μg / 5ng ~ 100ng |
5x RT Mix IV | 4 μl |
RNase-free H2O | To 20 μl |
2． 輕柔吸打混勻，50℃孵育15 min，進行逆轉錄反應。
3． 85°C加熱5 sec，終止反應。
逆轉錄產物可立即用于qPCR反應，或保存于-20°C，并在半年內使用；長期存放，請分裝后存于-70°C。
qPCR
建議取1~2μl cDNA產物原液作為20μl qPCR反應體系的模板。
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